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1.1.1样品制备秤量

固体样品粒度小于1mm；固液混合的样品，需用均质机搅拌均匀；液体样品，秤样前摇匀。

根据样品蛋白质含量选择取样量：固体样品秤取0.2~2.0g; 半固体样品或者糊状样品，秤取0.5~2.0g；液体样品取1.0~10.0g或者mL。

1.1.2 样品测定将样品置于消化管中，加入1片消化片（含4.5gK₂SO₄和CuSO_4• 5H₂O）和10mL 浓硫酸，慢慢摇动将样品浸润。把消化管放置到已预热到420度的消化炉上，消化60~90分钟，样品消化液呈现透明绿色液体。取出冷却至室温。然后将消化管置于FOSS自动蒸馏系统上，关上安全门，设定蒸馏蒸馏程序。

蒸馏程序如下表：

全自动定氮系统，可以自动滴定和计算得到结果。也可以选择人工滴定，然后计算得到结果。

同时采用1g蔗糖代替样品作为试验空白。消耗标准酸溶液不得超过0.2mL。

回收率试验可以采用N-乙酰胺或者色氨酸作为标准样品来进行测定。并且回收率必须满足要求：N-乙酰胺的氮回收率至少为99.5%，色氨酸的氮回收率至少为99.0%。可以根据实验室的情况来确定回收率试验的频率。

蒸馏系统的回收率可以用（NH₄）₂SO₄来测定。

对于糖含量较高、水分较多的样品，可以先在120度时蒸近干后消化，以防止发泡、爬壁、黏贴等现象；固体样品也可用无氮滤纸或秤量纸包裹，一起放入消化管中；加少量水、轻轻摇动，待样品浸润后再加硫酸，混匀。液体样品采用减量法秤取，或者移取。当样品放入消化管时，不要粘附在管壁上以免出现碳粒。万一粘附在管壁上，可以在加硫酸时缓慢冲下，以免样品消化不完全，是得结果偏低。消化时，硫酸必须过量，以防止氨的损失。如果样品脂肪含量高，需要增加硫酸的使用量时，催化剂也必须同时增加，同时蒸馏时，也要考虑增加碱液的使用量。控制好消化炉的温度和导流管的速度。消化前期，导流管的流速要大一些；后期要将导流管的流速变慢，使得硫酸在消化管的1/3处冷凝回流。消化炉温度到达420度后，开始计时。消化时间要控制好。消化不完全，会导致结果偏低。

利于批量处理，一次可以消化20个样品，消化温度容易控制，周期短。使用更少的酸和碱，减少环境污染；蒸馏时，自动样品稀释、自动添加碱液、自动蒸馏、自动排空、预先设定程序、避免出现错误。缩短蒸馏时间，更高效； 操作简便，硫酸铵的回收率能达到99.8%以上，准确度高。蛋白质在15%时，相对偏差在1%以内，精密度好。

挥发性盐基总氮系指肉、鱼类食品中的蛋白质在酶和细菌的作用下，发生分解而产生氨和胺等碱性含氮物。此类物质具有挥发性，具有一定的毒性。

挥发性盐基总氮是评价肉、鱼类产品的新鲜度的指标之一。

蛋白质分解后产生的挥发性含氮物质，在氧化镁弱碱性条件下加热，以氨的形式被释放出来。挥发出来的含氮物质，用硼酸溶液吸收，生成硼生酸铵用盐酸溶液滴定以定量。

2.2.1样品处理

肉类或者鱼类产品：去骨、去脂肪后，将样品粉碎均匀。秤取10.00样品。加入100mL水，不时振摇，浸渍30min后过滤。取滤液备用。

鱼粉等饲料类固体：粉碎过40目筛，混匀，秤取10g于锥形瓶中，准确加入100mL水。置于振荡器上振摇30min，过滤。取滤液备用。

2.2.2样品测定

首先设置仪器条件

其次，取5.00mL滤液至消化管中,再加5mL氧化镁悬浊液，立即蒸馏。滴定。

同时做空白试验。

在测试发性盐基氮TVBN之前，需要多次清洗整个系统，避免测试完蛋白质时，会有部分氮的残留导致挥发性盐基氮结果偏高。挥发性盐基氮是新鲜度的指标，因此新鲜鱼、肉制品，收到后应尽快处理分析。避免存放时间长后导致结果偏高。加碱量要足，加碱后氨已经开始形成，因此需立即将蒸馏管接到仪器上。蒸馏是否完全，可在冷凝管末端用精密pH试纸检验。

固体样品也可以直接秤样至750mL的消化管中进行蒸馏测试。仪器蒸馏时间为5min时，硫酸铵的回收率能达到95.5以上，因此准确度能满足要求。同时相对偏差在0.4%以内，所以该方法又着较好的精密度。所以该方法缩短了蒸馏时间，更高效；仪器自动完成蒸馏过程，减少人为误差，更为准确。

生产酱油是以大豆、面粉为原料，经过多种微生物和酶的左右，而得到的汁液。这种汁液经过加热灭菌消毒，加入核苷酸、焦糖色等配兑后达到专业标准后，经过沉淀过滤得到成品酱油。

酱油的鲜味来自于蛋白质的分解产物氨基酸，氨基酸的含量以氨基酸态氮来表示。氨基酸态氮含量越高，酱油的品质越好。而铵盐是酱油中存在的非营养的成分。主要来源有3种途径，一是大豆蛋白质被过度分解的产物；二是配兑酱油使用的添加剂带入，例如焦糖色和糖蜜；三十厂家为提高酱油的全氮和氨基酸态氮含量而违规加入的。铵盐的含量增高，对酱油的风味造成影响，因此酱油国家标准规定铵盐含量，不得超高氨基酸态氮的30%，并且作为强制性指标。

测定酱油中的铵盐有两方面的意义，一是判断酱油是否符合酿造酱油的国家标准，二是真实反映酱油中全氮和氨基酸态氮的含量，正确评价酱油的质量。目前铵盐的检测方法为GB/T 5009.39-2003 中规定的半微量定氮法。但是该方法的耗时比较长，1份样品需要30分钟以上。而采用自动定氮仪检测简单，快速，适合批量检测。

吸取2.0mL 样品，置于250mL 消化管中，加入0.5g氧化镁,将消化管放入自动凯氏定氮仪蒸馏器，关上安全门，仪器进行自动蒸馏、滴定。同时加水和0.5g氧化镁按照同样的条件做空白试验。

检测结果与传统的玻璃器皿蒸馏的结果基本无差异。蒸馏时间为5min即可达到较好的回收率，因此大大的缩短了检测时间，利于批量检测；如果是全自动的蒸馏仪，因为没有相应的转换系数，因此也采用固定的系数，然后人工计算的方法。

在生产加工果脯、蜜饯、干果、葡萄酒、干制蔬菜、粉丝等产品中经常添加亚硫酸盐类作为漂白剂。亚硫酸盐类除了漂白的作用外，还可以对食品起到杀菌、防腐、防虫、防霉等作用。因此二氧化硫或者亚硫酸盐类添加剂经常被滥用。今年来国家质检机构在对生产、流通等环节的食品进行监督检查时，二氧化硫超标的现象时有发生。

而且二氧化硫进入人体后，会刺激呼吸道、气管等呼吸系统。经常食用会损伤消化系统、严重的会危害人的肝脏、肾脏。目前二氧化硫常见的检测方法为蒸馏法和分光光度法。两种方法的步骤都非常繁琐。蒸馏法目前都是采用玻璃蒸馏仪，通常一份二氧化硫的蒸馏需要半小时以上，遇到容易起泡的样品，至少需要50分钟以上。而采用自动定氮仪的蒸馏系统，一份样品只需要几分钟即可。

根据不同的产品，蒸馏法一般有两种不同的原理。

4.1.1基本原理

样品被酸化后，通过加热，可将样品中的二氧化硫蒸馏出来。二氧化硫被乙酸铅吸收。吸收后被浓酸酸化。再用碘标液滴定，根据碘被消耗的量来计算试样中的二氧化硫。

4.1.2 样品处理

4.1.3 样品测定

秤取5.0g左右的样品（液体样品可以取5~10.0mL）于750mL的整流管中，加入蒸馏水250mL，10mL 1+1 盐酸溶液，立即将整流管与仪器连接，用25mL乙酸铅溶液做吸收液，然后进行蒸馏。当蒸馏液体积为200mL 左右时，接收管离开液面，再蒸馏1分钟。用少量的蒸馏水冲洗接收管。同时做空白试验。

向蒸馏液中加10mL 浓盐酸，1mL淀粉指示剂，用碘标准溶液滴定至变为蓝色30s不褪色。计算结果。

4.2.1 基本原理(参考AOAC962.16)

样品中亚硫酸盐与磷酸反应生成二氧化硫，通过加热，使得二氧化硫被蒸馏出来，被含有H₂O₂的吸收液吸收，并被氧化生成H₂SO₄。通过与NaOH标准溶液发生中和反应，测定其含量。

4.2.2 操作过程（参考AOAC962.16）：

秤取样品10左右样品到750mL的蒸馏管中；

在蒸馏管中加入150mL蒸馏水到蒸馏管中；

在接收瓶中加入25mL接收液（50mLH₂O₂到200mL蒸馏水中，然后加2.5mL甲基红指示剂）；

然后在蒸馏管中加入25mL30%的磷酸，立即连接到仪器上，开始蒸馏10min；

用0.05mol/L的氢氧化钠溶液滴定。同时做空白试验。

根据试验显示，自动定氮仪得到的二氧化硫结果的标准偏差在5%以内，满足标准方法精密度的要求。根据对比结果显示，该方法得到的结果与传统玻璃装置测定的结果没有显著差异。

自动定氮仪蒸馏时间短，只需10分钟即可蒸馏1份样品。因此检测快速，适合批量检测。

操作相对比较简单，开机后只需要选择好程序，即可开始蒸馏，整个蒸馏过程自动完成，安全可靠。

采用不同的处理，可以检测不同的样品，所以应用广泛。

在实际检测中也有一些需要特别注意的方面：接收液现配现用（针对AOAC的方法）；如果含量高于1000mg/Kg，减少秤样量；每次都应做空白；定期检测回收率。

因为需要与蛋白质等检测同时使用，所以仪器需要做简单的改装，例如连接管的材质需要更换。检测蛋白质，或者挥发性氨基氮等项目都是碱性的环境，而二氧化硫是酸性环境，因此在两个环境却换时，需要反复清洗多次，并需要检查系统是否已经达到要求。

自动定氮仪在检测蛋白质、挥发性盐基氮、铵盐和二氧化硫的检测中都能得到满意的结果。而且操作简单方便，整流速度快，省时省力，适合各种批量检测。所以在检测上诉项目时，是可以代替传统的玻璃蒸馏装置。

根据该仪器的原理，我们应该可以开发更多的应用，例如甲醛，氰化物等的应用。